Akademik Veri Yönetim Sistemi
International Congress of Reproduction and Artificial Insemination, Konya, Türkiye, 28 Eylül - 01 Ekim 2022, ss.131-132, (Özet Bildiri)
Ülkemizde sığırcılık endüstrisinin geliştirilmesi açısından dişi yavru elde edilmesi ve kaliteli damızlıkların yetiştirilmesi önem arz etmektedir. Embriyo transferi teknolojisinde cinsiyeti belirlenmiş sperma ile yapılan in vitro fertilizasyon (IVF) uygulamalarında spermatozoon DNA’sının dekondanse olamaması veya pronükleus gelişimindeki senkronizasyon bozukluklarından dolayı başarı oranları düşüktür (%2-10). Bu soruna intrasitoplazmik sperm enjeksiyonu (ICSI) uygulaması çözüm olarak değerlendirilmektedir. Ultrastrüktürel yapısı ve cinsiyet ayrıştırması sırasındaki işlemlerden dolayı ICSI uygulaması öncesinde boğa spermatozoasının dekondanse olabilmesi için ön işlemlerden geçirilmesi gerekmektedir. Çalışmada, boğa spermatozoasının DNA-protamin kompleksindeki disülfür bağlarının açılabilmesi ve protaminin açığa çıkabilmesi için tiyoglikolik asitin (TGA) 0,5, 1, 2,5 ve 5 mM konsantrasyonları, sıklıkla kullanılan ditiyotreitol (DTT) ve kontrol grubu ile karşılaştırılarak denenmiştir. Kullanılan TGA konsantrasyonlarının etkisini değerlendirebilmek için, canlılık, akrozom bütünlüğü, kapasitasyon, DNA bütünlüğü ve protamin oranları incelenmiştir. Sonuçlar değerlendirildiğinde, TGA’nın DTT’ye benzer şekilde yüksek oranlarda protaminleri açığa çıkardığı, DNA hasarı açısından DTT’nin çok yüksek oranlarda hasar oluşturduğu (p<0,05), TGA’nın ise kontrol grubu ile benzer DNA bütünlüğü sağladığı görülmüştür. Kapasite olmuş spermatozoa oranlarını TGA’nın 5 mM konsantrasyonunun önemli derecede artırdığı (p<0,05), akrozom hasarı ve canlılık oranlarında ise gruplar arasında farklılık olmadığı gözlenmiştir. Tüm veriler değerlendirildiğinde, TGA’nın boğa spermatozoasının disülfür bağlarını açarak protaminleri yüksek oranda açığa çıkarması ve düşük DNA hasarı oluşturması ile DTT’den üstün olduğu ve sığırlarda ICSI uygulaması öncesinde boğa spermatozoasının hazırlanmasında başarı ile kullanılabilecek güçlü bir aday olduğu görüşüne varılmıştır.
In terms of the development of the cattle industry in our country, it is important to obtain female offspring and raise quality livestock. In embryo transfer technology, in vitro fertilization (IVF) success rates with sexed semen are low (2-10%) due to disorders of sperm DNA decondensation or synchronization of pronucleus development. Therefore, intracytoplasmic sperm injection (ICSI) is considered as a solution to this problem. Due to ultrastructural changes of bull spermatozoa during sex-sorting, pre-treatment is required to decondense the DNA before ICSI. In this study, in order to open disulfide bonds in DNA-protamine complex of bull spermatozoa and to release protamine; 0.5, 1, 2.5 and 5 mM concentrations of thioglycolic acid (TGA) were used comparing with dithiothreitol (DTT), which is frequently used for this purpose. In order to evaluate the effect of TGA concentrations, viability, acrosome integrity, capacitation, DNA integrity and protamine ratios were examined. It was seen that TGA released high levels of protamines from DNA similar to the DTT. Although, all TGA concentrations retained similar DNA integrity with the control group, high DNA damage rates were observed with DDT (p<0.05) treatment compared to TGA treatment. It was observed that capacitated spermatozoa rates were significantly increased by the 5 mM concentration of TGA (p<0.05), while there was no difference among groups for acrosome damage and viability. It was concluded that TGA is superior to DTT for releasing high protamines by opening disulfide bonds, giving low DNA damage rates, and it is a strong candidate that can be used successfully in preparation of bull spermatozoa before bovine ICSI.