Klonlama ile transgenik koyun üretiminde donör hücrelerin nanopartiküller kullanılarak transfeksiyonu, Roscovitine ve Trichostati-A ile yeniden programlanması
Tez Türü: Doktora
Tezin Yürütüldüğü Kurum: İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa, Veteriner Fakültesi, Klinik Bilimler Bölümü, Türkiye
Tez Danışmanı: Serhat Pabuccuoğlu
Tezin Onay Tarihi: 2021
Tezin Dili: Türkçe
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:
Transgenik teknolojide başarıyı artıran klonlama (SCNT) yönteminin, çiftlik hayvanlarının üretiminde etkinliğinin düşük olması donör hücrenin yeniden programlanmasında yaşanan aksaklıklardan kaynaklıdır. Donör hücre DNA'sının oosit tarafından metilasyon seviyeleri düşürülerek oluşturulan yeniden programlamada, oosite bağlı yetersizliklerden kaynaklı kayıplar şekillenmektedir. Bu çalışmada; transgenik teknolojide SCNT yönteminin etkinliğinin artırılması amaçlı sağlıklı transgenik hücre eldesinde yüksek başarı sergileyen gen taşıyıcı nanopartiküler sistemlerin kullanılması ve donör nükleusun SCNT öncesinde yeniden programlanması amaçlı Roscovitine ve Trichostatin A inhibitörlerinin kullanılabilirliğinin araştırılması amaçlanmıştır. Sunulan çalışmada, poli(β-amino ester) (PBAE), çift tabakalı hidroksit bileşiği (LDH), modifiye kitosan (mChi), Lipofectamine® polimerleri koyun primer erişkin (PKF) ve embriyonik (PKEF) fibroblast hücrelerinde transgenik etkinlikleri, apoptotik aktiviteleri membran bütünlüğü analizleri ile karşılaştırılmıştır. Çalışmada, transfekte PKF ve PKEF hücrelerinde, 15 µM Roscovitine veya 50 nM Trichostatin A ile 24 saat muamele etme, kontakt inhibisyon ve serum açlığına bırakma yöntemleri uygulanmış, hücre siklus dağılımları, apoptotik aktivite oranları ve DNA metilasyon oranları yönünden karşılaştırılmıştır. Çalışmanın sonucunda; transgenik hücre üretiminde PBAE'nin (%80,88) Lipofectamine®'e (%51,35) göre daha iyi sonuç verdiği (p<0,05), Roscovitine inhibitörünün koyun SCNT çalışmalarına yönelik hücre siklusunu senkronize etmeye uygun olmadığı (%58,51), serum açlığının iki hücre grubunda da erken ve geç apoptoz oranlarının yüksek olduğu (p<0,05), kontakt inhibisyon ve Trichostatin A gruplarının G0/G1 hücre(%87,33, %83,49) ve canlı hücre (%94,20, %92,58) oranları açısından en iyi sonuçları verdiği (p<0,05), PKF hattında 50 nM Trichostatin A ile en düşük DNA metillenme oranı (%16,79, p<0,05) görülmüştür. Sonuç olarak SCNT ile transgenik çiftlik hayvanı üretiminde PBAE'in gen transferinde başarılı şekilde kullanılabileceği ve 50 nM Trichostatin A ile muamelenin somatik hücre senkronizasyonunu sağlayacağı belirlenmiştir.